Draizejev test: toksičnost oči in kože — postopek, kritike in alternative

Draizejev test: sporen postopek za testiranje toksičnosti oči in kože — postopki, etične kritike in sodobne alternative brez živali.

Draizejev test je test, s katerim ugotavljamo, ali je snov strupena. John H. Draize in Jacob M. Spines sta test prvič uporabila leta 1944. Test je bil najprej uporabljen za kozmetične izdelke, pozneje pa tudi za druge snovi. Da bi ugotovili, ali je snov strupena, jo za določen čas nanesemo na kožo ali oko živali. Po preteku tega časa se snov izpira, učinki pa se zabeležijo. Zelo pogosto so se uporabljale majhne živali, kot so kunci. Po testu živali opazujejo do 14 dni. Če test povzroči nepopravljive poškodbe kože ali oči, se žival po testu usmrti. Živali se lahko ponovno uporabijo za namene testiranja, če testirani izdelek ne povzroča trajnih poškodb. Živali se običajno ponovno uporabijo po obdobju "izpiranja", v katerem se vsi sledovi testiranega izdelka razpršijo s testnega mesta.

Postopek testiranja

Pogost postopek za testiranje oči vključuje vnos določene količine snovi v spodnjo očesno veko enega očesa preizkušene živali (pogosto zajca), medtem ko drugo oko ostane nenadznano kot kontrola. Občutljivo mesto se ne zaščiti z anestezijo v klasični izvedbi, čeprav so sodobne različice postopkov pogosto sprejele prejemanje anestetikov in analgetikov ali manjše količine snovi. Po aplikaciji se spremlja in ocenjujejo znaki, kot so motnost roženice, poškodbe šarenice, vnetje spojnice in oteklina vek. Ocene se običajno izvajajo v več časovnih točkah (npr. po 1, 24, 48 urah in nato večkrat do 14 dni ali več), da se ugotovi, ali so učinki prehodni ali trajni.

Pri testih na koži se običajno odstrani dlaka na majhnem predelu in nanese testno snov pod oblogo (occluded) ali odprto za določeno obdobje (npr. 4 ali 24 ur), nato pa se mesto opazuje zaradi rdečine, oteklin in odmiranja kože v naslednjih 1–14 dneh, odvisno od protokola.

Ocena poškodb

Za opisovanje poškodb se uporablja sistem točkovanja (npr. 0–4), ki ocenjuje posamezne komponente poškodbe: korneo (motnost, površinska izguba), irisa (sprememba barve ali funkcije), konjunktivo (rdečina, izcedek) in chemosis (oteklina spojnice). Uporabljeni rezultati služijo za razvrstitev snovi glede na stopnjo iritacije ali korozije, kar ima pomen za varnostno označevanje in regulativne zahteve.

Kritike in etična vprašanja

Testi so sporni. Glavne kritike vključujejo:

• etiko in dobrobit živali: test lahko povzroči hude bolečine in trajne poškodbe, pogosto s končnim usmrtitvijo;
• razlike med vrstami: zajčja oko ali koža se lahko odzivata drugače kot človeški organi, zato rezultati niso vedno neposredno prenosljivi;
• subjektivnost ocenjevanja: vizualne ocene so deloma subjektivne in lahko vodijo do variabilnosti med opazovalci;
• zahtevnost reproducibilnosti in nauk o človeški toksičnosti glede na napredne in specifične in vitro metode.

FDA podpira test in navaja, da "znanstvena skupnost do zdaj ni sprejela nobenega testa ali sklopa testov, ki bi nadomestil Draizejev test". V praksi pa so se v zadnjih letih tako regulatorji kot industrija začeli vedno bolj zanašati na validirane alternativne metode, kadar so primerne, in so sprejeli pristop, ki kombinira različne nehumane metode z obstoječimi podatki, da bi zmanjšali število in obseg testiranj na živalih.

Regulativne spremembe in načela 3R

V znanstveni skupnosti in regulativnih krogih prevladujejo načela 3R: Replace (nadomestitev živali z alternativami), Reduce (zmanjšanje števila uporabljenih živali) in Refine (izboljšanje postopkov, da se zmanjša bolečina in trpljenje). Zaradi tega je uporaba Draizejevega testa v mnogih državah upadla, predvsem za namene, kjer so na voljo validirane alternativne metode. V Evropski uniji so npr. za kozmetične sestavine in izdelke uvedene stroge omejitve glede testiranja na živalih in sprejetja alternativ.

Alternativne metode

Razvili so se številni alternativni testi, ki lahko nadomestijo Draizejev test za številne aplikacije. Med njimi so:

• HET-CAM: test na ovojnici kokošjega jajca (hen's egg test chorioallantoic membrane), primeren za določanje iritacije sluznice in žilnih reakcij;
• Isolated/Isolated Chicken Eye (ICE): testi z izoliranim piščančjim očesom ali drugimi eks vivo preparati, ki ocenjevalcem omogočajo merjenje poškodb roženice brez živega zajca;
• BCOP (Bovine Corneal Opacity and Permeability): test z govejimi rožničnimi preparati, ki ocenjuje motnost in prepustnost roženice;
• rekonstruirani človeški epitelni modeli (npr. EpiOcular, SkinEthic): laboratorijsko vzgojene tridimenzionalne kultуре človeških celic, ki simulirajo očesno ali kožno tkivo in omogočajo oceno citotoksičnosti in iritacije;
• in vitro celične metode in biokemijski testi: meritve citotoksičnosti, vnetnih markerjev ali kemičnih reakcij na molekularni ravni;
• in silico modeli in QSAR (Quantitative Structure–Activity Relationship): računalniške napovedi na podlagi kemijskih lastnosti snovi;
• kombinirani pristopi za odločitve (integrated testing strategies): uporaba več neinvazivnih metod in obstoječih podatkov za regulativno odločanje brez dodatnih testov na živalih.

Pomembno je poudariti, da so nekatere od teh metod mednarodno validirane in opisane v smernicah (npr. pri OECD) ter jih regulatorji v določenih primerih sprejemajo kot nadomestilo za testiranje z živalmi.

Kdaj se Draizejev test še uporablja

Kljub razpoložljivosti alternativ se Draizejev test v nekaterih primerih še uporablja, zlasti kadar ni zanesljive alternativne metode za specifično vrsto snovi ali ko je treba potrditi določene vrste poškodb v živi celici. V takih primerih strokovnjaki pogosto skušajo zmanjšati trpljenje z uporabo najmanjših učinkovitih odmerkov, anestezije, jasnih humane endpointov ter ponovne uporabe živali le, če to ne povzroča dodatnih trajnih poškodb.

Zaključek

Draizejev test je zgodovinsko pomembna metoda za ocenjevanje toksičnosti oči in kože, vendar prinaša etične in znanstvene izzive. Zaradi izboljšav v alternativnih metodah in sprememb v regulativah se njegova uporaba zmanjšuje. Tam, kjer je še vedno v uporabi, velja strog nadzor, upoštevanje načel 3R in iskanje možnosti za nadomestitev z varnejšimi, bolj ponovljivimi in etičnimi pristopi.

Vprašanja in odgovori

V: Kaj je Draizejev test?

V: Kdo je razvil Draizejev test?

V: Katere živali se običajno uporabljajo za to vrsto testiranja?

V: Kako dolgo je treba opazovati živali po Draizejevem testu?

V: Ali obstajajo alternative uporabi živali v teh testih?

V: Ali je mogoče žival ponovno uporabiti v teh vrstah testov?

V: Zakaj se je uporaba te vrste testiranja v zadnjih letih zmanjšala?

Išči po črki